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来源:汤柔馥 日期:2025-03-20在生物医疗领域,mRNA技术作为一种前沿的平台技术,广泛应用于预防性疫苗、治疗性疫苗、肿瘤治疗、免疫治疗以及基因编辑等关键方向。然而,在体外转录(IVT)合成过程中,除了所需的mRNA产物,还会产生各种杂质,包括反应酶、NTP、DNA模板、盐离子和副产物等,这些杂质会对mRNA的纯度和准确性产生影响。为此,必须通过有效的纯化手段将目标mRNA从混合物中分离出来,确保其安全性和有效性。
常规的mRNA纯化方法主要包括氯化锂沉淀、磁珠纯化、硫酸铵沉淀以及亲和层析等。其中,沉淀法和磁珠法操作相对简单快捷,适用于早期研发阶段,而在工业生产中,层析纯化则是最主要的方法,但往往需要专业设备,这增加了设备和人力成本。然而,瀚海新酶推出的轻量级mRNA亲和层析纯化试剂盒,能够实现无需专业设备的纯化,具有操作简单的特点,并能在30分钟内完成样本纯化,保证目标产品的高纯度和低NTP残留,适用于各种下游实验需求。
氯化锂沉淀法的原理是利用锂离子在特定pH条件下减少RNA分子之间的同电性相斥力,使RNA分子更容易聚集形成沉淀。操作简单,但在工业生产中,由于残留锂盐的毒性和对低温条件的要求,可能会导致能源成本的上升。
磁珠纯化法主要分为Oligo(dT)磁珠和羧基磁珠。对于Oligo(dT)磁珠,通过其表面偶联的亲和配体与带Poly(A)尾的mRNA特异性结合,利用磁力将目标RNA与其它杂质分离。而羧基磁珠则利用mRNA的负电荷在酸性条件下进行静电作用,实现纯化。虽然磁珠法能有效去除杂质,但需注意储存和使用条件,以保证mRNA的完整性。
硫酸铵沉淀法通过根据目标mRNA与杂质的溶解度差异选择性沉淀mRNA,并具有生物安全性高的特点。这种方法的高回收率和去除杂质能力,使其成为IVT体系快速分离mRNA的理想选择。
亲和层析的Oligo(dT)亲和色谱在高盐条件下,盐离子屏蔽了mRNA与填料之间的静电排斥,从而实现mRNA的高效捕获。与传统亲和层析方法相比,瀚海新酶的亲和层析纯化试剂盒,无需专业设备和低温操作,快速、高效地完成样本纯化,大幅度提升mRNA的纯度与活性。
该亲和层析纯化试剂盒适用于不同起始量的RNA样品,能有效纯化mg级mRNA样本,操作流程简单,节约设备和人力成本。同时,纯化后的mRNA完整度高,NTP去除效果显著,整个操作过程不超过30分钟,满足各种实验需求。
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